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行業(yè)動(dòng)態(tài)

基因擴增PCR的試劑貯存和準備區的操作

更新日期:2019年5月10日 大字 小字
基因擴增PCR是專(zhuān)門(mén)用來(lái)檢驗艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一種檢測手段。它可以通過(guò)將病毒體內所含的基因進(jìn)行擴增的方法,測出一些病毒含量不高的感染者體內是否含有特定的病毒。由于該檢測方法可以測出普通檢驗難以檢測出的病毒并具有靈敏度高、特異性高、快捷、對樣品要求低等優(yōu)點(diǎn),因此被臨床醫生廣為認可,已廣泛應用于醫院的臨床診斷和各防疫檢測部門(mén)的禽疫病診斷。

基因擴增PCR的試劑貯存和準備區:
下述操作在該區進(jìn)行:貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。
貯存試劑和用于標本制備的材料應直接運送至試劑貯存和準備區,不能經(jīng)過(guò)產(chǎn)物分析區。在打開(kāi)含有反應混合液的離心管或試管前,應將其快速離心數秒。試劑原材料須貯存在本區內,并在本區內制備成所需的貯存試劑。當貯存試劑溶液經(jīng)檢查可用后,應將其分裝貯存備用,避免由于經(jīng)常打開(kāi)反應管吸液而造成污染。

含反應混合液的離心管或試管在冰凍前都應快速離心數秒。大多數用于擴增的試劑都應冰凍貯存。為避免因單次反應取液而頻繁的凍融主貯存試劑,應分裝冰凍貯存試劑溶液。貯存試劑的分裝體積根據通常在實(shí)驗室內一次測定所需的擴增反應數來(lái)決定。

主反應混合液的組成成份尤其是聚合酶的適用性和穩定性通過(guò)預試驗來(lái)檢查,評價(jià)結果須有書(shū)面報告。對于"熱啟動(dòng)"技術(shù),聚合酶也可不包含在主反應混合液中。

在整個(gè)本區的實(shí)驗操作過(guò)程中,操作者須戴手套,并經(jīng)常更換。此外,操作中使用一次性帽子也是一個(gè)有效地防止污染的措施。 嚴禁用嘴吸取液體,加樣器和吸頭等須經(jīng)高壓處理。

工作結束后須立即對工作區進(jìn)行清潔。本工作區的實(shí)驗臺表面應可耐受諸如次氯酸鈉的化學(xué)物質(zhì)的消毒清潔作用。實(shí)驗臺表面的紫外照射應方便有效。由于紫外照射的距離和能量對去污染的效果非常關(guān)鍵,因此可使用可移動(dòng)紫外燈,在工作完成后調至實(shí)驗臺上60~90cm內照射。由于擴增產(chǎn)物僅幾百bp,對紫外線(xiàn)損傷不敏感,因此基因擴增PCR片段須延長(cháng)照射時(shí)間,是照射過(guò)夜。實(shí)驗室及其設備的使用須有日常記錄。
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