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常見(jiàn)問(wèn)題

超微量分光光度計主要運用在哪幾個(gè)方面?

更新日期:2018年4月11日 大字 小字
  超微量分光光度計本身就是一類(lèi)很重要的分析儀器,無(wú)論是物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、醫學(xué)、材料學(xué)、環(huán)境學(xué)等科學(xué)研究領(lǐng)域。超微量分光光度計不僅涵蓋了可見(jiàn)光分光光度計的功能而且也可以進(jìn)行紫外分光光度計的應用,更常用以下幾方面:

超微量分光光度計

  1.核酸的定量
  核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率更高的功能??梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸,單鏈DNA、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的更高吸收峰的吸收波長(cháng)260nm。每種核酸的分子構成不一,因此其換算系數不同。定量不同類(lèi)型的核酸,事先要選擇對應消光因子。如:1OD的吸光值分別相當于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經(jīng)過(guò)上述系數的換算,從而得出相應的樣品濃度。除了核酸濃度,分光光度計顯示幾個(gè)非常重要的比值表示樣品的純度,如A260/A280的比值,用于評估樣品的純度,因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白質(zhì)或者酚類(lèi)物質(zhì)的影響。A230表示樣品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。
  2.UV-VIS常規可見(jiàn)-紫外檢測
  全波長(cháng)超微量分光光度計可以像普通的紫外-可見(jiàn)分光光度計一樣行使功能。如BIO-DL MicroDrop可以顯示從185到910nm的光波下樣品的吸光值。更多可以同時(shí)指定檢測40個(gè)波長(cháng)下的吸光值并把數據顯示在報告中。
  3.蛋白質(zhì)的直接定量(UV法)
  這種方法是在280nm波長(cháng),直接測試蛋白。蛋白質(zhì)測定過(guò)程非常簡(jiǎn)單,先測試空白液,然后直接測試蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)直接定量方法,適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質(zhì)。紫外直接定量法相對于比色法來(lái)說(shuō),速度快,操作簡(jiǎn)單;但是容易受到平行物質(zhì)的干擾,如DNA的干擾;另外敏感度低,要求蛋白的濃度較高。
  4.比色法蛋白質(zhì)定量
  蛋白質(zhì)通常是多種蛋白質(zhì)的化合物,比色法測定的基礎是蛋白質(zhì)構成成分:氨基酸(如酪氨酸,絲氨酸)與外加的顯色基團或者染料反應,產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應的氨基酸數目直接相關(guān),從而反應蛋白質(zhì)濃度。
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