對于經(jīng)常做分子生物學(xué)實(shí)驗的人來(lái)說(shuō),PCR就如家常便飯,變性—退火—延伸,基本原理和過(guò)程一直沒(méi)變。隨著(zhù)PCR技術(shù)的發(fā)展,研究人員推出了普通PCR的升級版本來(lái)解決PCR實(shí)驗過(guò)程中常常出現的擴增效率低,特異性差等問(wèn)題,如現在已被我們熟知的溫度梯度PCR、降落PCR、巢式PCR等,這里我們先來(lái)說(shuō)說(shuō)梯度PCR,在進(jìn)行PCR優(yōu)化時(shí),研究者都會(huì )考慮退火溫度的優(yōu)化,這時(shí)就需進(jìn)行梯度PCR。
梯度PCR是在一臺PCR儀上同時(shí)進(jìn)行同一PCR反應時(shí),以引物的理想退火溫度Tm-5作為為參考值,設置不同退火溫度,這些溫度對應PCR儀模塊的不同的孔,且呈現梯度遞增或遞減,更終摸索出針對這臺PCR儀和當前外在環(huán)境的合適的退火溫度。
雖然我們可以通過(guò)梯度PCR快速摸索出適合儀器的退火溫度,減少繁瑣的重復試驗,但在實(shí)際應用中仍然會(huì )遇到惱人的問(wèn)題。經(jīng)常會(huì )有人困惑同一反應體系在原來(lái)的PCR儀上摸索出合適的退火溫度,當換到另一臺PCR儀(同一型號/不同品牌/不同型號)上進(jìn)行相同的擴增反應時(shí),或者更換耗材(PCR管等)后擴增效果并沒(méi)有之前理想。究其原因,主要是由于熱傳導效率的不同而導致反應管內樣品的溫度和PCR儀模塊差異所造成的。梯度PCR摸索出的條件只有在PCR實(shí)驗、儀器、試劑和耗材等絕對一致時(shí)才是有效的,否則任何一個(gè)組成要素的改變都將會(huì )帶來(lái)新的不確定性。顯然要徹底解決以上問(wèn)題,需要一款能夠實(shí)現高效率的熱能傳導,并保持模塊溫度與樣品溫度高度一致的PCR儀來(lái)進(jìn)行實(shí)驗。這時(shí)我們無(wú)需梯度PCR就可以解決模塊和樣品之間存在的溫度差異及差異的不確定性等諸多問(wèn)題,同時(shí)這也大大簡(jiǎn)化了PCR程序,更加省時(shí)、省試劑。
寶予德Life Eco PCR儀不僅具有30℃的更寬限梯度功能,而且擁有出色的控溫系統,采用專(zhuān)有的TAS(溫度補償技術(shù)),有效避免了加熱模塊熱傳導的邊緣效應問(wèn)題,為PCR實(shí)驗提供一流的穩定性和均一性,確保實(shí)驗結果的可靠性和重復性。
此外,用戶(hù)可根據反應體系選擇Blook或Tube控溫模式,配合選用的試劑和優(yōu)質(zhì)的PCR管,實(shí)現更佳的擴增條件。