準確的分析方法對于生物化學(xué)實(shí)驗是更為重要的,在各種生物化學(xué)分析技術(shù)中,首先要熟練掌握的就是準確的移液技術(shù)。為此要用到各種形式的移液管,其中有一些是學(xué)生們在化學(xué)實(shí)驗中未用過(guò)而在生化實(shí)驗中是常用的。
1 滴管
使用方便,可用于半定量移液,其移液量為1mL~5mL,常用2mL,可換不同大小的滴頭。滴管有長(cháng)、短兩種,新出的一種帶刻度和緩沖泡的滴管,可以比普通滴管更準確地移液,并防止液體吸入滴頭。
2 移液管(吸管)
吸管使用前應洗至內壁不掛水珠,1mL 以上的吸管用吸管專(zhuān)用刷刷洗,0.1mL、0.2mL 和0.5mL的吸管可用洗滌劑浸泡,必要時(shí)可以用超聲清洗器清洗。由于鉻酸洗液致癌,應盡量避免使用。若有大量成批的吸管洗后沖洗,可使用沖洗桶,將吸管尖端向上置于桶內,用自來(lái)水多次沖洗后再用蒸餾水或無(wú)離子水沖洗。
吸管分為兩種,一種是無(wú)分度的,稱(chēng)為大肚吸管,精確度較高,其相對誤差A 級為0.7%~0.8%,B 級為1.5%~0.16%,液體自標線(xiàn)流至口端(留有殘液),A 級等待15s,B 級等待3s。另一種吸管為分度吸管,管身為一粗細均勻的玻璃管,上面均勻刻有表示容積的分度線(xiàn),其準確度低于胖肚吸管,相對誤差A 級為0.8%~0.2%,B 級為1.6%~0.4%,A 級、B 級在吸管身上有A、B 字樣,有”快”字則為快流式,有”吹”字則為吹出式,無(wú)”吹”字的吸管不可將管尖的殘留液吹出。吸、放溶液前要用吸水紙擦拭管尖。
3 微量進(jìn)樣器
微量進(jìn)樣器常用作氣相和液相色譜儀的進(jìn)樣器,在生化實(shí)驗中主要是用作電泳實(shí)驗的加樣器。
??煞譃闊o(wú)存液和有存液兩種。
(1)10μL 以下的更微量液體進(jìn)樣。
無(wú)存液微量進(jìn)樣器:進(jìn)樣器的不銹鋼芯子直接通到針尖端處,不會(huì )出現存液。
(2)10μL~100μL 有存液微量進(jìn)樣器:不銹鋼的針尖管部分是空管,進(jìn)樣器的柱塞不能到達,因而管內會(huì )存有空氣或液體。
使用注意事項是:
①不可吸取濃堿溶液,以免腐蝕玻璃和不銹鋼零件;
②因為有存液,所以吸液時(shí)要來(lái)回多拉幾次,將針尖管內的氣泡全部排盡;
③針尖管內孔更小,使用后尤其是吸取過(guò)蛋白質(zhì)溶液后,必須立即清洗針尖管,防止堵塞。若遇針尖管堵塞,不可用火燒,只能用φ0.1mm 的不銹鋼絲耐心串通;
④進(jìn)樣器未潤濕時(shí)不可來(lái)回干拉芯子,以免磨損而漏氣;
⑤若進(jìn)樣器內發(fā)黑,有不銹鋼氧化物,可用芯子蘸少量肥皂水,來(lái)回拉幾次即可除之。
4 自動(dòng)取液器
這種取液器在生化實(shí)驗中大量地使用,它們主要用于多次重復的快速定量移液,可以只用一只手操作,十分方便。移液的準確度(即容量誤差)為±(0.5%~1.5%),移液的精密度(即重復性誤差)更小些,為≤0.5%。
取液器可分為二種:一種是固定容量的,常用的有100μ L 等多種規格。每種取液器都有其專(zhuān)用的聚丙烯塑料吸頭,吸頭通常是一次性使用,當然也可以超聲清洗后重復使用,而且此種吸頭還可以進(jìn)行120℃高壓滅菌;另一種是可調容量的取液器,常用的有200μL、 500μL 和1000μL 等幾種。
可調式自動(dòng)取液器的操作方法是用拇指和食指旋轉取液器上部的旋鈕,使數字窗口出現所需容量體積的數字,在取液器下端插上一個(gè)塑料吸頭,并旋緊以保證氣密,然后四指并攏握住取液器上部,用拇指按住柱塞桿頂端的按鈕,向下按到第一停點(diǎn),將取液器的吸頭插入待取的溶液中,緩慢松開(kāi)按鈕,吸上液體,并停留1~2秒鐘(粘性大的溶液可加長(cháng)停留時(shí)間),將吸頭沿器壁滑出容器,用吸水紙擦去吸頭表面可能附著(zhù)的液體,排液時(shí)吸頭接觸傾斜的器壁,先將按鈕按到第一停點(diǎn),停留一秒鐘(粘性大的液體要加長(cháng)停留時(shí)間),再按壓到第二停點(diǎn),吹出吸頭尖部的剩余溶液,如果不便于用手取下吸頭,可按下除吸頭推桿,將吸頭推入廢物缸。
自動(dòng)取液器的使用注意事項是:
①吸取液體時(shí)一定要緩慢平穩地松開(kāi)拇指,絕不允許突然松開(kāi),以防將溶液吸入過(guò)快而沖入取液器內腐蝕柱塞而造成漏氣。
②為獲得較高的精度,吸頭需預先吸取一次樣品溶液,然后再正式移液,因為吸取血清蛋白質(zhì)溶液或有機溶劑時(shí),吸頭內壁會(huì )殘留一層”液膜”,造成排液量偏小而產(chǎn)生誤差。
③濃度和粘度大的液體,會(huì )產(chǎn)生誤差,為消除其誤差的補償量,可由試驗確定,補償量可用調節旋鈕改變讀數窗的讀數來(lái)進(jìn)行設定。
④可用分析天平稱(chēng)量所取純水的重量并進(jìn)行計算的方法,來(lái)校正取液器,1mL 蒸餾水20℃時(shí)重0.9982g。